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商品屬性

該制品為全體系凍干微球制品，內含恒溫擴增所用的反應緩沖液、SYBR Green 熒光染料、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等，使用時只需要加入引物、模板即可進行核酸恒溫擴增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性（逆轉錄），還具有依賴于 DNA 的聚合酶活性，因此無論 DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進行恒溫擴增。該制品是進行 LAMP 及RT-LAMP 擴增反應的試劑。
SYBR Green 系列產品為實時熒光檢測的專用試劑，可直接在恒溫熒光儀或定量 PCR 以上進行 LAMP 反應擴增。
儲存：-20℃保存 2 年；室溫（25℃）保存>6 個月。
使用凍干微球進行全擴增體系用品的制備方法：將優化的擴增引物分裝于 0.2 ml EP 管底部，于 70-80℃條件烘干1-2h。烘干后的 0.2 ml EP 管已經含有干燥的擴增引物，再加入一粒凍干微球即可制備成全擴增體系干燥品，該干燥品無需冷鏈運輸，可長期保存。
反應體系說明：每一個凍干微球為按照 25 μl 反應體系建立，在使用時只需要加入 25 μl 的 ddH2O 或模板即可進行反應。
使用實例，進行 LAMP 熒光擴增
1. 配制熒光 LAMP 反應體系在 0.2 ml EP 反應管中加入下述試劑
Bst 4.0 SG Bead 1 粒
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到液體總量 25 μl
10xLAMP Primer Mix 濃度：FIP/BIP 分別為 16 μM、LoopF/B 分別為 4-8 μM、F3/B3 分別為 2 μM。
2. 反應體系配好后，置于熒光定量 PCR 儀中于 65°C進行反應 15~30min。1min 收集一次熒光信號。讀取擴增曲線進行陰性和陽性判讀。
3. 根據熒光擴增曲線判讀陽性和陰性。
注意事項：
（1）關于礦物油的使用，在配制完 LAMP 反應體系后，可加入一滴礦物油覆蓋于反應液上部，可以有效的減少氣溶膠的污染。實驗證明礦物油并不影響機器的熒光數值讀取。
（2）關于擴增曲線的異常：由于 LAMP 擴增速度較快，熒光信號讀取可能存在矯正計算問題，這與熒光設備的軟件算法有管。在有些熒光 PCR 儀上，在相對熒光模式下，表現出曲線飛峰、終點曲線下降的問題。此時調整到原始熒光值模式下觀察結果，或致電相應設備供應商進行咨詢。

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