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ATCC15834 感受態細胞100ul*100

更新時間:2025-11-29

簡要描述:

ATCC15834 感受態細胞100ul*100菌株一種常用于質粒克隆的菌株。其φ80lacZΔM15基因的產物可與pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實現a互補,可用于藍白斑篩選。recA1和endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩定和高純度質粒DNA的提取。

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ATCC15834 感受態細胞100ul*100以下是的訂購信息儲存條件:-70℃凍存
操作方法:
1. 取-80℃保存的農桿菌感受態于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態時插入冰中。
2.每100 μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA(轉化效率較高,*次使用前做預實驗確定所加質粒的量),用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
ATCC15834 感受態細胞100ul*1003. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養基,于28℃振蕩培養2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養箱培養2-3天
注意事項
1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10;質粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉化效率急劇下降;質粒增大一倍,轉化效率下降一個數量級。
ATCC15834 感受態細胞100ul*1002. 混入質粒時應輕柔操作。轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時,由于營養不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應減少質粒用量。
4. *濃度不應高于25 μg/ml,過高的*濃度不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態計算轉化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉化效率降低到1/2。
5. 培養基中加入*的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌;根據所用菌株抗性加入Ti質粒篩選抗生素可防止Ti質粒丟失,但Ti質粒篩選抗生素不利于農桿菌的轉基因操作,所以一般培養農桿菌時不考慮這些抗生素,Ti質粒丟失的概率極低(可以忽略)。

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 DSIP 人促睡眠肽 規格: 48T/96T

 GHRH 人促生長激素釋放激素 規格: 48T/96T

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 CRH 人促腎上皮質激素釋放激素 規格: 48T/96T

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 TSH 人促甲狀腺素 規格: 48T/96T

 TSHR 人促甲狀腺激素受體抗體 規格: 48T/96T

 LH * 規格: 48T/96T

人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 規格: 48T/96T

 E3 人雌三醇 規格: 48T/96T

 E 人雌激素 規格: 48T/96T

 ER 人雌二醇受體 規格: 48T/96T

 E2 人雌二醇 規格: 48T/96T

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 VMA 人垂草扁桃酸 規格: 48T/96T

 PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 規格: 48T/96T

 PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 規格: 48T/96T

 VLA 人遲現抗原 規格: 48T/96T

ATCC15834 感受態細胞100ul*100 VLA 人遲現抗原 規格: 48T/96T

 MPF 人成熟促進因子 規格: 48T/96T

 OGP 人成骨生長肽 規格: 48T/96T

 SOD 人超氧化物歧化酶 規格: 48T/96T

 hs-CRP 人超敏C反應蛋白 規格: 48T/96T

4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養1 小時(160-220 轉/分鐘),目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,使菌體復蘇。
 C58C1 電感受態細胞50ul*105 將離心管內容物混勻,吸取100 μl 已轉化的感受態細胞加到含相應抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養12-16 小時。
●  涂布用量可根據具體實驗來調整。如轉化的DNA 總量較多,可取更少量轉化產物涂布平板;反之,如轉化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉化產物涂布平板。如果預計的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養板)
 注意事項
1. 感受態細胞應保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時間過長,以避免降低感受態細胞的轉化效率。
2. 進行轉化操作時,應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。
3 為防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接反應液,以重新轉化,將損失降到低。
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